植物菌質體(Candidatus Phytoplasma)為全球重要的植物病原之一，已知可感染超過千種植物，包括多項果樹與經濟作物，一般可經由扦插、嫁接等無性繁殖方式、寄生性莬絲子及葉蟬、木蝨、飛蝨等媒介昆蟲造成病害傳播蔓延，造成植株花器葉化、矮化、黃化與簇葉等病徵，對農業生產造成嚴重損失。由於菌質體至今無法純培養，使其鑑定與檢測面臨高度挑戰。在植物檢疫與防疫需求日益提升的背景下，建立符合國際標準的菌質體檢測與鑑定技術，對國內作物病害診斷與種子帶菌調查具有關鍵重要性。本計畫第一年研究首先完成臺灣兩大主要菌質體群之代表材料收集與建置，包括第一群(16SrI，aster yellows group)之日日春葉片黃化病菌質體(Periwinkle leaf yellowing phytoplasma, PLY phytoplasma, 16Sr I-B)，以及第二群(16SrII)之落花生簇葉病菌質體(Peanut witches' broom, PnWB phytoplasma, 16Sr II-A)，採集自雲林臺西與土庫落花生田區。此材料庫為後續檢測方法建立提供重要基礎。將材料以TANBead與taco兩套萃取系統做比較，並根據A260/280與A260/230判定DNA純度。結果顯示TANBead萃取之核酸純度較佳(1.79-1.91)，且可穩定應用於不同疑似寄主包括兔兒菜、紫背葉、蔓花生與狗牙根等雜草相。另依據國際檢測方法建立PCR與半巢式PCR系統，測試後最終選定P1A/P7A作為第一次PCR(約1.8 kb)以及P1A/16SSr作為半巢式PCR(約1.5 kb)，選用的PLY菌質體與PnWB菌質體材料皆可成功增幅預期片段。進一步對增幅產物進行基因定序並將結果在NCBI(National Center for Biotechology Information, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)基因資料庫中進行核酸序列比對(BLAST)，其相似度均高於99.2%，確認樣本分別屬於PLY與PnWB菌質體。
 ▲圖一、植物菌質體（Candidatus Phytoplasma）簡介 |
 ▲圖二、植物菌質體檢測技術之建立 |
